Sistem Analisis Laboratorium HeliX Cyto yang Sepenuhnya Otomatis

Spesifikasi

• Nama Produk: heliX cyto
• Pabrikan: Biosensor Dinamis GmbH
• Versi: 1.0

Informasi Produk

• Sistem heliX cyto dirancang untuk Sitometri Interaksi Sel Tunggal (scIC) guna mengukur kinetika pengikatan molekul berlabel fluoresensi ke target pada permukaan sel dengan cara yang diselesaikan waktu.

Petunjuk Penggunaan Produk

Menggunakan Chip heliXcyto

• Chip heliXcyto berisi satu saluran mikrofluida dengan titik elektroda untuk penangkapan dan pengukuran sel. Pastikan penempatan chip yang tepat dan ikuti petunjuk untuk menangkap sel.

Chip Perawatan

• Gunakan Chip Perawatan hanya untuk pembersihan, pengujian, dan perawatan. Hindari penggunaannya untuk eksperimen guna mencegah kontaminasi.

Menjalankan Penyangga

• Gunakan Running Buffer 1 (RB 1) selama pengukuran. Lihat lembar kompatibilitas scIC di panduan utama untuk informasi lebih lanjut.

Analisis Sensorgram

• Pantau sensorgram secara real-time di perangkat lunak heliOS selama pengukuran. Analisis respons fluoresensi dari waktu ke waktu untuk mengekstrak laju kinetik.

Pasifitas

• Pertimbangkan penggunaan pasivasi sebagai langkah opsional untuk mencegah penyerapan analit dengan menginkubasi reagen pasivasi pada chip.

Normalisasi

• Normalisasi adalah proses untuk menstandardisasi data agar dapat dibandingkan dan dianalisis. Ikuti prosedur normalisasi sesuai panduan pengguna.

PERKENALAN

• Panduan ini dimaksudkan sebagai panduan singkatview sistem heliXcyto dan kemampuannya. Semua bab dijelaskan lebih lanjut dalam panduan utama heliXcyto yang terdapat di https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

Terminologi heliXcyto Sitometri Interaksi Sel Tunggal

• Sitometri Interaksi Sel Tunggal (scIC) adalah teknologi yang mengukur kinetika pengikatan molekul berlabel fluoresensi (analit) ke target (ligan) pada permukaan sel dengan merekam sinyal fluoresensi dalam cara yang terselesaikan waktu.

Analit

• Analit adalah molekul berlabel fluoresensi dalam fase gerak yang dapat mengikat target pada permukaan sel.

Ligand

• "Ligand" adalah nama yang digunakan dalam perangkat lunak heliOS untuk menggambarkan target pada permukaan sel tempat analit dapat berikatan. Target ini dapat berupa molekul reseptor, lipid, gula, atau molekul permukaan sel lainnya.

Perangkap Sel

• Perangkap sel adalah sangkar polimer biokompatibel yang permeabel terhadap aliran pada chip heliXcyto. Perangkap ini dirancang untuk menangkap dan melumpuhkan sel dengan ukuran berbeda, mulai dari sekitar 6 hingga 25 µm di dalam saluran aliran. Perangkap sel tersedia dalam 3 ukuran berbeda: kecil, sedang, dan besar.

Chip heliXcyto

• Chip heliXcyto berisi satu saluran mikrofluida dengan bukaan di setiap sisinya. Dua titik elektroda emas terletak di tengah saluran.
• Satu titik berfungsi sebagai titik referensi, dan titik kedua berisi sangkar polimer biokompatibel 3D untuk menangkap sel dan berfungsi sebagai titik pengukuran. Titik pengukuran dapat berisi 1 atau 5 perangkap dengan jenis yang sama.
• Titik referensi memungkinkan referensi sinyal fluoresensi yang dikumpulkan secara real-time. Chip heliXcyto dapat digunakan kembali dan sekali pakai.

Chip Perawatan

• Chip Pemeliharaan adalah chip mikrofluida saluran tunggal yang digunakan untuk semua operasi pembersihan, pengujian, dan pemeliharaan.
• Operasi ini meliputi rutinitas Clean & Sleep, rutinitas Wake Up and Prime, pencucian sistem, dan uji Fluidics. Chip ini tidak boleh digunakan untuk eksperimen aktual dengan larutan sel/protein untuk mencegah kontaminasi lebih lanjut pada chip.

Menjalankan Penyangga

• Running buffer adalah buffer yang digunakan dalam heliXcyto selama pengukuran. Penggunaan Running Buffer 1 (RB 1) umumnya direkomendasikan.
• Silakan merujuk pada lembar kompatibilitas scIC yang terdapat dalam panduan utama untuk informasi lebih lanjut.

Sensorgram

• Sensorgram scIC adalah plot respons fluoresensi dalam hitungan per detik (cps) dari waktu ke waktu, yang menggambarkan perkembangan interaksi pada atau di dalam sel. Kurva ini dapat viewdiedit secara real time di heliOS selama pengukuran.
• Saat menganalisis sensorgram, eksponensial yang paling sesuai dengan jejak fluoresensi yang diamati ditentukan dan laju kinetik (kon, koff) diekstraksi.

Pasifitas

• Pasivasi merupakan langkah opsional dalam proses ini, di mana reagen pasivasi disuntikkan ke dalam chip dan diinkubasi untuk memblokir permukaan. Hal ini dapat membantu mencegah adsorpsi analit ke dalam material chip.

Normalisasi

• Langkah normalisasi digunakan untuk memperhitungkan sedikit perbedaan sinyal akibat pengumpulan sinyal dari setiap titik pengukuran oleh detektor terpisah. Pewarna fluoresen dengan konsentrasi tertentu (berdasarkan konsentrasi analit tertinggi dan tingkat penandaan analit) disuntikkan pada awal pengujian. Langkah normalisasi ini secara otomatis dimasukkan ke dalam metode pengukuran, dan puncak normalisasi yang terukur digunakan untuk mengoreksi secara otomatis perbedaan antar detektor selama analisis data, sebelum referensi waktu nyata.

Prinsip Pengukuran scIC

Aplikasi scIC

• Sitometri Interaksi Sel Tunggal (scIC) mengukur laju kinetik dan afinitas pengikatan dan pelepasan analit berlabel fluoresensi dari targetnya langsung pada sel hidup.
• Deteksi analit dalam scIC bersifat independen terhadap ukuran dan oleh karena itu berkaitan dengan molekul apa pun dari sub-nm hingga > 100 nm dan relevan dengan semua kelas molekul mulai dari molekul kecil, peptida, aptamer, nanobodi, afibodi, antibodi, format antibodi bispesifik, protein, kompleks protein, hingga vesikel (eksosom), nanopartikel lipid, dan virus.

Teknologi scIC dapat mengatasi area aplikasi berikut:

• pengukuran sinyal amplititudo pada layar pengikat
• analisis kinetik laju kon dan koff
• evaluasi afinitas dan aviditas melalui model koff dan biphasic fit
• uji spesifisitas
• kuantifikasi relatif protein membran pada permukaan sel
• studi pengelompokan dan kompetisi epitop
• uji penghambatan
• penilaian internalisasi protein target

Kemampuan Perangkat Keras heliXcyto

Sistem Fluida

• Sistem fluida heliXcyto dialiri hingga 3 botol penyangga yang berbeda, memungkinkan variasi dalam pengoperasian dan pemeliharaan penyangga. Pompa di heliXcyto dapat diatur pada laju aliran antara 20 dan 500 µL/menit, untuk memenuhi berbagai kebutuhan.amppersyaratan le dan pengujian. Saluran aliran chip terhubung ke sistem fluida melalui dua lubang. Lubang sisi kiri terhubung ke sampsaluran le, buffer, dan pencucian, sedangkan bukaan sisi kanan dihubungkan ke saluran regenerasi.
• Sistem fluida dua arah ini memungkinkan penangkapan sel yang stabil saat menjalankan berbagai langkah pengukuran dan akhirnya regenerasi chip untuk penggunaan ulang chip dalam pengujian.
• Gambar 1. Integrasi chip dalam sistem Fluida

Sistem Optik

• Sinyal fluoresensi dibangkitkan oleh dioda pemancar cahaya (LED) merah dan hijau dan dideteksi oleh empat penghitung foton tunggal, yang mengumpulkan sinyal merah dan hijau dari setiap titik di seluruh kedalaman saluran.
• Dua sinyal independen dapat dipantau secara bersamaan di titik pengukuran yang sama, memungkinkan dua interaksi diukur sekaligus dalam pengaturan pengujian dua warna.
• Gambar 2. Pengaturan optik
• Pengumpulan sinyal dari setiap titik pengukuran ditangani oleh detektor terpisah, yang dapat mengakibatkan sedikit perbedaan dalam hitungan mentah. Untuk memperhitungkan hal ini, langkah normalisasi secara otomatis disertakan dalam pengujian pembangkitan data.
• Selain penghitung foton tunggal, instrumen ini dilengkapi dengan kamera CCD dan mikroskop cahaya pantul. Alat-alat ini memungkinkan pencitraan sel secara real-time, sehingga memungkinkan penilaian integritas sel dan kualitas analit selama pengukuran.
• Pengaturan gabungan ini memastikan interaksi dan kondisi biologis dilacak, memberikan evaluasi eksperimen yang komprehensif.

alur kerja scIC

Proses Pengukuran scIC dapat dibagi menjadi 3 langkah utama

1. Desain Eksperimental di heliOS: Setiap pengukuran dimulai dengan merancang eksperimen dalam perangkat lunak heliOS. Alur kerja pengujian diatur dengan memilih metode yang telah ditentukan dan menyesuaikan parameter eksperimen, seperti lini sel yang digunakan, konsentrasi analit, dan kondisi buffer. HeliOS secara otomatis menghitung jumlah sel, analit, buffer, dan larutan lain yang diperlukan untuk pengukuran, sehingga menyederhanakan proses persiapan.
2. Persiapan buffer, analit, dan sel: Setelah desain eksperimen selesai, material yang dibutuhkan disiapkan sesuai spesifikasi yang diberikan oleh heliOS. Buffer, analit, dan sel dimasukkan ke dalam autos instrumen.ampBaca.
3. Pengukuran dan Analisis Data: Sistem ini menjalankan serangkaian pengukuran interaksi otomatis waktu nyata terjadwal tanpa memerlukan intervensi lebih lanjut dari pengguna. Data dapat dianalisis saat pengukuran masih berjalan untuk mendapatkan wawasan langsung tentang hasilnya.

Pengujian scIC di heliOS

Selain pengujian pembangkit data, perangkat lunak ini juga menyediakan metode untuk pengujian chip, pembersihan, dan pemeliharaan instrumen.

Tabel 1. Uji pembangkit data terverifikasi

Kinetika scIC	Mengukur kinetika penuh pada sel dengan asosiasi analit yang dapat disesuaikan antara 1 dan 5 konsentrasi, diikuti dengan disosiasi tunggal setelah konsentrasi tertinggi. Saluran hijau atau merah. Berisi opsi untuk pengujian Analit saja.
Kinetika scIC – Warna Ganda	Mengukur kinetika lengkap pada sel dengan asosiasi analit yang dapat disesuaikan antara 1 dan 5 konsentrasi, diikuti dengan disosiasi tunggal setelah konsentrasi tertinggi. Saluran hijau dan merah diaktifkan secara bersamaan. Berisi opsi untuk uji Analit saja.
Disosiasi scIC – Warna Ganda	Mengukur disosiasi analit dari sel yang telah diinkubasi sebelumnya dengan analit berlabel fluoresensi dengan saluran hijau dan/atau merah.

Persiapan dan Pengembangan Pengujian untuk Pengukuran scIC

Ada beberapa hal yang perlu dipertimbangkan sebelum menyiapkan pengukuran scIC

• Konsentrasi analit, Derajat Pelabelan, sifat, dan kualitas.
• Solusi normalisasi dan daya eksitasi.
• Kualitas dan penanganan sel.

Konsentrasi Analit dan Tingkat Pelabelan

• Sesuai praktik pengukuran kinetik standar, kami merekomendasikan pemilihan rentang konsentrasi molar analit sebesar 0.1x hingga 10x dari konstanta disosiasi kesetimbangan (Kd) yang diharapkan untuk kinetika beberapa konsentrasi. Untuk kinetika konsentrasi tunggal atau pengukuran disosiasi, konsentrasi analit harus berkisar antara 1x hingga 10x dari Kd yang diharapkan. Volume analit yang dibutuhkan, dihitung untuk waktu asosiasi 10 menit dengan laju alir 25 µL/menit, totalnya sekitar 300 µL.
• Derajat Pelabelan (DOL) untuk suatu analit idealnya adalah 1, meskipun nilai DOL 2 atau 3 masih dapat diterima. Namun, perlu diketahui bahwa jumlah label yang lebih banyak pada suatu analit dapat memengaruhi sifat pengikatannya, dan dapat meningkatkan kemungkinan agregasi atau pengikatan yang tidak spesifik. Untuk mencapai DOL yang optimal, ikuti protokol yang disertakan dalam Kit Pelabelan yang berisi pewarna merah atau hijau dari lini reagen heliXcyto.
  Normalisasi
• Normalisasi adalah langkah pertama dalam semua metode pembangkitan data. Normalisasi mengkompensasi sedikit variasi sinyal yang disebabkan oleh penggunaan detektor terpisah untuk setiap titik pengukuran. Pada langkah ini, pewarna fluoresen dengan konsentrasi yang ditentukan pengguna disuntikkan di awal pengujian.
• Konsentrasi Larutan Normalisasi dihitung dengan mengalikan konsentrasi analit berlabel fluoresensi tertinggi yang digunakan dalam pengukuran dengan Derajat Pelabelan (DOL) analit tersebut. Konsentrasi ini memandu daya eksitasi LED yang diterapkan selama pengukuran. Tujuannya adalah agar puncak Larutan Normalisasi mencapai sinyal fluoresensi yang kurang lebih sama. amplitude sebagai konsentrasi analit tertinggi.
• Lihat bagan konsentrasi larutan Normalisasi di panduan utama untuk mengatur nilai awal. Perhatikan bahwa bagan ini memandu pengaturan awal, tetapi daya eksitasi LED dapat disesuaikan lebih lanjut selama pengembangan pengujian.

Kualitas dan Persiapan Sel

• Viabilitas sel harus di atas 95%, dan sel-sel umumnya harus dalam kondisi baik. Untuk sel-sel yang melekat, kami merekomendasikan penggunaan sel-sel yang konfluen 50-70%.
• Untuk sel suspensi, kami sarankan pemanenan pada fase pertumbuhan pertengahan log. Diperlukan 50 µl suspensi sel pada 1E+06 sel/mL tiap proses.

Pemanenan sel suspensi

1. Sentrifus sekitar 2E+06 sel pada kecepatan 300 g selama 7 menit untuk menghilangkan media kultur sel. Buang supernatan.
2. Cuci sel sekali dengan mensuspensikan kembali pelet sel dalam sekitar 1 mL DPBS. Sentrifus suspensi pada kecepatan 400 g selama 5 menit untuk menghasilkan pelet sel hidup. Buang supernatan dengan hati-hati untuk memisahkan fragmen dan media.
3. Suspensikan perlahan-lahan dalam 1 mL DPBS, pindahkan suspensi ke atas saringan sel dan saring suspensi dengan aliran gravitasi.
4. Ukur konsentrasi sel dari suspensi yang disaring dan sesuaikan ke 1E+06 sel/mL.
   • TIP: Beberapa sel suspensi cenderung membentuk gugus. Suspensikan kembali gugus secara perlahan dan lakukan langkah penyaringan sebelum langkah sentrifugasi pertama.
   • Gunakan ujung pipet berlubang lebar saat menangani suspensi sel untuk menghindari gaya geser tinggi selama pemindahan atau resuspensi.

Pemanenan sel yang melekat

1. Cuci sel dengan DPBS steril.
2. Pisahkan sel dari labu kultur menggunakan reagen disosiasi pilihan Anda (misalnya TrypLE).
3. Suspensikan kembali sel yang terdisosiasi ke volume media yang diinginkan dan saring dengan saringan sel 30 nm.
4. Secara opsional, tambahkan EDTA jika sel sangat melekat (konsentrasi akhir 5 mM).
5. Sentrifus sel pada kecepatan 300 g selama 7 menit untuk menghilangkan media kultur sel. Buang supernatan.
6. Suspensikan kembali sel ke dalam 1 mL DPBS.
7. Ukur konsentrasi sel dan sesuaikan ke 1E+06 sel/mL.
   • TIP: Media sel yang diencerkan 1:4 dengan DPBS dapat digunakan untuk menambahkan nutrisi ke dalam sel.amples dalam kasus sel sensitif atau alur kerja pengujian yang panjang.

Fiksasi Sel

1. Sentrifus hingga 10E+06 sel pada kecepatan 300 g selama 7 menit untuk menghilangkan media kultur sel. Buang supernatan.
2. Suspensikan kembali pelet sel dalam 1 mL PBS, sentrifus dan buang supernatan.
3. Suspensikan kembali pelet sel dalam 500 µL PBS/2% PFA (62.5 µL larutan PFA 16% + 437.5 µL PBS).
4. Inkubasi sel pada suhu ruangan selama 10 menit (dengan pengocokan lembut sesekali).
5. Tambahkan 500 µL PBS dan sentrifus suspensi pada kecepatan 400 g selama 5 menit untuk menghilangkan PFA.
6. Buang supernatannya.
7. Suspensikan kembali sel dalam 1 mL PBS, saring melalui saringan sel 30 µm, sentrifus (400 g, 5 menit) dan buang supernatan.
8. Suspensikan kembali sel dalam sekitar 1 mL PBS (opsional: sesuaikan dengan konsentrasi akhir 5E+06 sel/mL).
9. Simpan sel tetap pada suhu 2-8°C, gunakan dalam waktu satu bulan.
   • Jika lebih banyak sel yang harus diperbaiki, harap tingkatkan jumlahnya sebagaimana mestinya.
   • CATATAN: Kecepatan sentrifugasi selama pengambilan sel dapat disesuaikan dengan jenis sel, jika sel sensitif dan gaya g yang lebih rendah biasa digunakan.
   • Konsentrasi PFA dapat bervariasi antara 0.5 dan 4%.

Pengaturan Pengujian scIC

Pengujian scIC berikut harus disertakan dalam pengembangan pengujian dan dapat diulang dalam alur kerja pengujian selanjutnya.

Alur kerja pengembangan pengujian dibagi menjadi 3 langkah berurutan yang berbeda:

1. Tes Cyto chip
2. Uji analit saja
3. Uji kinetika

Tes Cyto Chip

• Kualitas chip baru perlu dievaluasi sebelum menggunakan chip sito dalam pengukuran. Mulailah dengan menjalankan Uji Chip Sito secara terpisah. Lihat bab chip sito Helix dalam panduan utama tentang cara menyiapkan dan menilai uji chip.

Uji Hanya Analit

• Pengembangan uji scIC diawali dengan Uji Analit Saja, yang mengevaluasi perilaku analit berlabel fluoresensi pada permukaan chip baru tanpa sel.
• Pengujian ini juga dapat diulang secara berkala untuk mengkaji stabilitas analit yang diberi label. Uji Hanya Analit scIC dapat dikonfigurasi dalam uji Kinetika dengan mengaktifkan kotak centang Hanya Analit di bawah pengaturan Sel.
• Untuk penilaian kualitas analit, konsentrasi tertinggi yang digunakan sudah mencukupi dan dapat dikonfigurasi dengan menonaktifkan semua kecuali satu asosiasi dalam pengujian.

Pengaturan Alur Kerja Uji Kinetika

• Uji kinetika biasanya digunakan dalam alur kerja otomatis yang mencakup uji pembangkit data sekaligus elemen pemeliharaan. Setelah analit lolos uji kendali mutu "Analyte Only", analit tersebut dapat digunakan dalam pengukuran pada sel.
• Untuk mengukur laju kinetik secara andal, respons sinyal selama asosiasi harus bergantung pada konsentrasi, meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi analit.
• Konsentrasi tertinggi harus mencapai titik puncak, yang menunjukkan bahwa kondisi stabil pengikatan telah tercapai. Disosiasi perlu dijalankan cukup lama untuk melepaskan sebagian besar analit yang terikat (lebih dari 5%) agar kurva dapat disesuaikan dengan andal.
• Gunakan parameter default dalam kondisi pengujian sebagai titik awal dan sesuaikan lebih lanjut tergantung pada hasil Anda.

Examp1. Alur kerja pengujian yang direkomendasikan

Alur kerja pengujian memungkinkan pengguna untuk mengantrekan metode pengukuran dan pemeliharaan berdasarkan kebutuhan eksperimen spesifik mereka.

Alur kerja pengujian dapat mencakup langkah-langkah berikut dalam urutan yang ditunjukkan:

1. Perdana (Chip pemeliharaan)
2. Kinetika scIC (Sel A, Analit A, Cyto chip)
3. Sistem Cuci (Chip perawatan)
4. Kinetika scIC (Sel B, Analit A, Cyto chip)
5. Sistem Cuci (Chip perawatan)
6. Kinetika scIC yang dikonfigurasi hanya untuk analit (Analit A, chip Cyto)
   • Tahap Prime dan System Wash dilakukan pada Chip Pemeliharaan. System Wash disertakan saat beralih ke jalur sel yang berbeda dan sebelum melakukan Uji Analit Saja di akhir alur kerja.
   • Untuk keterangan lebih rinci, rujuk bagian tentang pencucian sistem Cyto pada panduan utama.
   • Saat melakukan pengujian kinetika pada sel, pertimbangkan kelangsungan hidup sel, yang bergantung pada garis sel.
   • Untuk lini sel yang sensitif, disarankan untuk hanya menjalankan 1-2 pengujian per alur kerja pengujian. Untuk lini sel yang lebih tangguh, pengujian tambahan dapat diantrekan.
   • CATATAN: Untuk pengujian tambahan, siapkan larutan sel dalam botol terpisah dengan memberi nama sel secara berbeda.
   • Pastikan semua reagen segar dan telah disaring melalui filter 0.22 µm. Terakhir, masukkan reagen yang telah disiapkan ke dalam instrumen sesuai petunjuk heliOS.
   • Proses dapat dimulai dengan mengklik ikon panah biru “Jalankan” dan mengikuti langkah-langkah di Wizard Mulai Pengujian.
   • Setelah pengujian dimulai, perangkat beroperasi secara independen hingga seluruh alur kerja pengujian selesai.

Analisis percobaan scIC

Alur Kerja Analisis scIC

• Data scIC dapat berbeda dari data biosensor standar karena kompleksitas alami peristiwa yang terjadi pada sel yang ditangkap pada permukaan chip heliXcyto, yang dapat mengakibatkan ketidakteraturan sensorgram.
• Oleh karena itu, kontrol kualitas ditekankan pada gambar yang diambil pada setiap langkah pengukuran dan untuk sensorgram yang dihasilkan di halaman arahan analisis otomatis.
• Selain itu, heliOS menyediakan alat untuk mengatasi ketidakteraturan sensorgram selama analisis data manual scIC.

proses analisis data scIC:

1. Inspeksi Gambar:
   • Periksa semua gambar yang diambil selama pengukuran (tab Gambar di jendela percobaan).
   • Berapa banyak sel yang tetap stabil dalam perangkap selama seluruh pengukuran?
   • Bagaimana kondisi selnya? Periksa granularitas dan integritas sel.
   • Apakah perangkap bersih setelah langkah regenerasi?
2. Pemeriksaan data mentah:
   • Periksa data mentah untuk titik referensi 1 dan titik pengukuran 2
   • Sinyal puncak normalisasi harus mendekati atau lebih tinggi dari sinyal data mentah tertinggi.
   • Apakah sinyal kembali ke tingkat dasar di kedua titik, atau adakah bukti pengikatan yang tidak spesifik?
3. Pemeriksaan Data yang Dinormalisasi:
   • Apakah lompatan injeksi untuk titik 1 dan titik 2 terlapis dengan benar?
4. Pemeriksaan Data Referensi:
   • Apakah langkah regenerasi mengembalikan sinyal ke garis dasar? Jika tidak, periksa apakah ada sel atau debris di dalam perangkap setelah regenerasi dengan cara:viewmengambil gambar.
   • Apakah terdapat lonjakan, outlier, atau ketidakteraturan lain pada kurva yang direferensikan? Jika ya,view gambar untuk mengidentifikasi penyebab potensial dan mempertimbangkan penyesuaian manual.
5. Pemeriksaan Kesesuaian Data:
   • Melakukan penilaian kualitas visual
   • Apakah kecocokannya secara akurat menggambarkan perilaku kurva, atau apakah garis kecocokannya melintasi sensorgram?
   • Apakah kecocokannya menggambarkan kelengkungan data dengan tepat?
   • Apakah ampApakah ketinggiannya sesuai dengan data yang direferensikan?

Analisis Data Otomatis scIC

• Proses analisis otomatis scIC memproses data mentah hingga plot kontrol kualitas dan data yang disesuaikan hanya dalam beberapa klik.
  1. Buka eksperimen scIC dengan mengklik dua kali pada eksperimen yang dipilih di Daftar Eksperimen
  2. Klik tombol Analisis besar berwarna biru di bagian bawah tab eksperimen.
  3. Dari alur kerja percobaan, pilih pengujian yang ingin Anda analisis.
  4. Pilih Kinetics scIC dari jenis analisis yang tersedia dan klik Berikutnya.
     • CATATAN: Jika eksperimen masih berjalan, hanya pengujian yang telah selesai yang akan ditampilkan dalam daftar. Setelah pengujian dipilih, jendela berikutnya akan menampilkan semua jenis analisis yang tersedia, sesuai dengan metode/pengujian yang digunakan.
  5. Jika perlu, konfigurasikan analisis di jendela berikut. Model kecocokan default adalah "Kinetika - Level ujung bebas" dengan kotak centang "Paksa level ujung kecocokan ke Nol" diaktifkan. Penyimpangan dari model ini hanya jika biologi atau data memerlukan deskripsi yang lebih kompleks.
  6. Setelah konfigurasi diselesaikan, klik Analisis untuk melihat semua snapshot turunan, sensorgram mentah dan yang telah diproses, serta nilai kinetika.
• Karena kompleksitas yang melekat pada sampdigunakan untuk pengujian scIC, sensorgram yang dihasilkan dapat memiliki ketidakteraturan.
• Untuk mengatasi hal ini, kontrol kualitas gambar dan sensorgram ditekankan dalam analisis otomatis.
• Jika koreksi manual atau analisis lebih mendalam dibutuhkan, alat untuk koreksi artefak disediakan dalam Scratchpad analisis manual.

Perawatan dan Dekontaminasi heliXcyto

• Perawatan heliXcyto sangat penting untuk memastikan kinerja dan umur panjang instrumen yang optimal. Perawatan rutin mencakup prosedur pembersihan yang mencegah kontaminasi dan menjaga integritas sistem, sehingga menghasilkan hasil yang akurat dan pengoperasian yang lancar. Perawatan yang konsisten sangat penting untuk keandalan instrumen dan kualitas hasil eksperimen.
  Pemeliharaan heliXcyto mencakup dua prosedur utama: Pencucian Sistem Cyto, yang dapat diintegrasikan langsung ke dalam alur kerja pengujian, dan Pembersihan & Tidur, yang dilakukan sebagai rutinitas terpisah untuk memelihara instrumen tepat sebelum digunakan setelah pengukuran semalaman sebelumnya atau saat tidak digunakan selama lebih dari 2 hari.
• Baik System Wash maupun Clean & Sleep memerlukan keberadaan Chip Perawatan heliX® di baki chip.

Rutinitas Bersih & Tidur

• Rutinitas Clean & Sleep ditujukan untuk pembersihan dan mematikan/menyimpan perangkat. Metode ini membilas tabung fluida perangkat heliX® terlebih dahulu dengan air ultra murni, kemudian dengan etanol 70%. Terakhir, semua tabung diventilasi dengan udara.
• Prosedur pembersihan ini sepenuhnya otomatis dan memakan waktu sekitar 40 menit. Selama prosedur, etanol akan dikeluarkan ke dalam botol air, sehingga isi botol harus dibuang setelahnya.
• Setelah Clean & Sleep, instrumen memasuki mode tidur dan tidak dapat digunakan hingga Wake Up & Prime dilakukan. Chip Perawatan heliX® diperlukan untuk kedua proses tersebut.
• PENTING: Untuk mencegah kontaminasi tabung, pastikan untuk membuang isi botol air (campuran air/etanol) dan mengosongkan wadah limbah setelah prosedur pembersihan.

Penutupan dan penyimpanan jangka panjang

• Jika tidak digunakan dalam jangka waktu lama, harap keluarkan botol yang berisi air dan etanol setelah prosedur Clean & Sleep dari baki penyangga dan biarkan tabung terkena udara.
• Lepaskan juga Chip Perawatan heliX® dan simpan di dalam kantong aslinya. Ini mencegah aliran balik dan kontaminasi. Matikan perangkat.

Pencucian sistem Cyto

• heliXcyto System Wash membersihkan sistem mikrofluida secara menyeluruh menggunakan Larutan Pembersih 3 (CS3) dalam waktu sekitar 45 menit. CS3 diambil dalam dua detiktages. Jarum pertama dan samploop diisi dan diinkubasi untuk menghilangkan segala kontaminan.
• CATATAN: Jalankan Cyto System Wash setidaknya setiap hari saat perangkat sedang digunakan. Kami menyarankan untuk menambahkan metode Cyto System Wash ke alur kerja pengujian setelah setiap pengujian (saat beralih ke lini sel baru atau jikaamp(kualitasnya suboptimal) atau hingga akhir alur kerja pengujian. Ganti chip pemeliharaan setelah maksimum 50 Pencucian Sistem Cyto yang ditampilkan sebagai jumlah Regenerasi di baki Chip. view dari kontrol Perangkat.

Kontak

• Biosensor Dinamis GmbH
• Perchtinger Str. 8/10
• 81379 München
• Jerman
• Bruker Ilmiah LLC
• Jalan Manning 40, Taman Manning
• Billerica, MA 01821

Amerika Serikat

• Informasi Pemesanan pesan.biosensor@bruker.com
• Dukungan Teknis support.dbs@bruker.com
• www.dynamic-biosensors.com
• Instrumen dan chip direkayasa dan diproduksi di Jerman.
• ©2025 Biosensor Dinamis GmbH
• Hanya untuk keperluan penelitian. Tidak untuk digunakan dalam prosedur diagnostik klinis.

Tanya Jawab Umum

Tanya Jawab Umum scIC

Bisakah saya menggunakan kembali chip heliXcyto?

Ya, chip heliXcyto dapat digunakan kembali dan sekali pakai. Ikuti panduan pembersihan dan penyimpanan yang tepat.

Apa tujuan dari Chip Pemeliharaan?

Chip Pemeliharaan digunakan untuk operasi pembersihan, pengujian, dan pemeliharaan guna memastikan sistem berfungsi dengan baik.

Seberapa sering saya harus membersihkan perangkat?

Sistem fluida heliXcyto dijaga kebersihannya dengan metode Cyto System Wash dan Clean&Sleep. Sistem mikrofluida direkomendasikan untuk dibersihkan melalui Cyto System Wash pada Chip Pemeliharaan setelah setiap pengujian (terutama saat mengganti jenis sel) atau paling lambat di akhir alur kerja pengujian. Prosedur Clean&Sleep harus diterapkan tepat sebelum digunakan setelah pengukuran panjang sebelumnya (misalnya di pagi hari setelah percobaan semalaman) atau ketika heliXcyto tidak akan digunakan selama lebih dari 2 hari setelah dimatikan.

Berapa lama larutan: RB 1 / air / CS 1 / CS 3 / Larutan normalisasi dapat disimpan dalam perangkat?

Umumnya, sebelum setiap pengukuran, semua larutan harus diperiksa untuk mengetahui sisa volume dan potensi kekeruhan atau presipitasi. Jika demikian, larutan harus segera diganti. Air dan RB 1 harus diganti setiap hari dan RB 1 harus disaring sebelum setiap pengukuran. Larutan Normalisasi yang telah diencerkan dapat digunakan selama 2 hari berturut-turut. Larutan pembersih stabil selama kurang lebih 3 hari.

Berapa lama saya dapat menggunakan chip heliXcyto?

Tanggal kedaluwarsa chip heliXcyto dapat diperiksa di tab Baki Chip pada bagian Perangkat di heliOS. Tidak ada jaminan integritas chip setelah tanggal kedaluwarsa. Namun demikian, selama perangkap tetap stabil, permukaan bersih, dan latar belakang fluoresensi berada di bawah batas yang ditunjukkan dalam Uji Chip, chip dianggap dapat digunakan untuk pengukuran. Pembersihan chip eksternal secara berkala (Kit Pembersih Chip CCK-1-1) disarankan untuk dilakukan setelah penggunaan chip guna memperpanjang masa pakai chip secara signifikan.

Berapa lama saya dapat menggunakan chip Pemeliharaan?

Chip Pemeliharaan perlu diganti setelah 50 pencucian Sistem (dihitung sebagai regenerasi di tab Baki Chip pada kontrol Perangkat di heliOS).

Seberapa sering Uji Chip heliXcyto harus dilakukan?

Uji Chip mengumpulkan informasi tentang latar belakang fluoresensi, kebersihan, dan integritas chip sebelum memulai eksperimen baru. Uji ini harus dilakukan setidaknya sekali saat chip baru digunakan, tetapi disarankan untuk dilakukan sebelum atau di awal setiap eksperimen guna memeriksa status chip. Hal ini memungkinkan penyesuaian kondisi pengukuran dan pelacakan abnormalitas pada sensorgram ke chip atau perangkat.

Apa itu kimia pelabelan analit?

Pewarna fluoresen merah atau hijau, masing-masing, digabungkan oleh kit pelabelan kami melalui NHS-ester ke amina primer dalam analit protein (misalnya lisin atau N-terminus). Detail dan bagian pemecahan masalah dapat ditemukan di manual heliXcyto Labeling Kit pewarna merah (Pelabelan Kit pewarna merah 2 CY-LK-R2-1) dan heliXcyto Labeling Kit pewarna hijau (Pelabelan Kit pewarna hijau CY-LK-G1-1) dari kami. webtoko.

Di mana menemukan kredensial heliOS dan informasi lisensi?

Proses memasukkan kredensial dan informasi lisensi dijelaskan di bagian Instalasi heliOS dalam panduan heliXcyto dari kami websitus (panduan heliXcyto). Informasi lisensi Anda harus disimpan di folder scIC di Desktop PC heliXcyto, yang dibuat oleh Spesialis Aplikasi kami selama pelatihan.

Berapa rentang eksitasi/emisi heliXcyto?

Eksitasi merah adalah 605-625 nm, emisi (deteksi) 655-685 nm. Eksitasi hijau adalah 490-510 nm, emisi hijau adalah 525-575 nm.

Berapa kali saya harus mengukur eksperimen yang sama untuk keandalan statistik?

Untuk mencapai laju kinetik rata-rata yang andal, direkomendasikan untuk melakukan 3-4 kali pengulangan pengukuran Kinetika 3-konsentrasi pada populasi sel yang homogen. Dalam kumpulan data yang konsisten, laju asosiasi dan disosiasi replikasi harus berada dalam rentang waktu 2-4 kali.

Berapa sensitivitas pengukuran scIC?

Batas deteksi terendah dalam hal ekspresi target bergantung pada pelabelan analit, tetapi umumnya scIC sudah dapat mengukur kinetika hanya pada 1000-10000 molekul per sel. Untuk meningkatkan sensitivitas, disarankan untuk menangkap setidaknya 5 sel, dan DOL analit 5-10 serta daya LED harus diseimbangkan untuk mencapai jumlah fluoresensi maksimum.

Berapakah batas deteksi heliXcyto dalam hal laju kinetik?

Silakan merujuk ke Spesifikasi Teknis heliXcyto untuk batas teknis terbaru, yang dapat ditemukan dalam panduan heliXcyto (panduan heliXcyto). Konstanta disosiasi Kd: 10 pM hingga 1 mM Konstanta laju asosiasi kγ: 1E3 hingga 1E7 M-1s-1 Konstanta laju disosiasi kγ: 1E-6 hingga 1 s-1 Untuk informasi lebih lanjut, silakan periksa panduan heliXcyto kami dari weblokasi.

Dokumen / Sumber Daya

Sistem Analisis Laboratorium HeliX Cyto yang Sepenuhnya Otomatis [Bahasa Indonesia:] Panduan Pengguna Sistem Analisis Laboratorium Otomatis Penuh heliX cyto, heliX cyto, Sistem Analisis Laboratorium Otomatis Penuh, Sistem Analisis Laboratorium Otomatis, Sistem Analisis Laboratorium, Sistem Analisis, Sistem

Referensi

• Panduan Pengguna